Particules Lentivirales d'Activation (h) AMPKβ2: sc-403537-LAC

PRKAB2 code la sous-unité régulatrice β2 de la protéine kinase activée par l’AMP (AMPK), un complexe central de détection énergétique qui intègre l’état ATP/AMP cellulaire afin de coordonner l’homéostasie métabolique. AMPKβ2 contribue à l’assemblage de la kinase hétérotrimérique et participe au ciblage des substrats ainsi qu’à la stabilité du complexe, influençant ainsi des programmes en aval tels que l’oxydation des acides gras, la captation du glucose, l’autophagie et l’inhibition de la signalisation anabolique via des voies incluant mTOR. Dans les tissus humains, la signalisation AMPK interagit avec la fonction mitochondriale et les réponses au stress, reliant la régulation de PRKAB2 à des phénotypes pertinents pour l’adaptation métabolique et la survie cellulaire en conditions de limitation nutritive. Des altérations de l’activité de la voie AMPK ont été étudiées dans des contextes tels que la résistance à l’insuline, la dysfonction métabolique associée à l’obésité et la reprogrammation métabolique des cellules tumorales, ce qui positionne PRKAB2 comme un nœud mécanistique dans la recherche sur l’homéostasie énergétique.

Les particules d'activation lentivirales AMPKβ2 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de PRKAB2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales AMPKβ2 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription PRKAB2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de AMPKβ2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif PRKAB2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.