Amphiphysin II Double Nickase Plasmid (h): sc-401263-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Amphiphysin II Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Amphiphysin II Double-Nickase-Plasmid (h) und Amphiphysin II Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf BIN1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Amphiphysin II: sc-23918
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Amphiphysin II Double Nickase Plasmid (h) | sc-401263-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Amphiphysin II Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401263-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BIN1 kodiert Amphiphysin II, ein membranumformendes Protein mit BAR-Domäne, das die Bindung an Phosphoinositide mit der Erkennung von Membrankrümmung und der clathrinvermittelten Endozytose koppelt. Amphiphysin II ist an der Bildung endozytotischer Vesikel, der Biogenese von T-Tubuli im Muskel sowie am Transport von Rezeptoren und Signalkomplexen beteiligt und verknüpft so Membrandynamik mit der Organisation des Zytoskeletts. Über SH3-vermittelte Interaktionen mit Partnern wie Dynamin und endozytotischen Adaptoren beeinflusst BIN1 Membranfission und Kompartimentierung, die die intrazelluläre Signalübertragung und synaptische Funktion mitgestalten. Eine veränderte BIN1-Expression oder die Nutzung unterschiedlicher Isoformen wurde mit neuromuskulären Phänotypen in Verbindung gebracht und ist genetisch an neurodegenerativen Erkrankungen beteiligt, was seine Eignung zur Modellierung krankheitsrelevanter Defekte im Membrantransport in menschlichen Zellen unterstützt.
Amphiphysin II Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des BIN1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von BIN1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die BIN1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit BIN1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.