Amphiphysin II CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401263

Übersicht

BIN1 kodiert Amphiphysin II, ein BAR-Domänen-Protein, das Membrankrümmung erkennt und die clathrinvermittelte Endozytose, die Biogenese von T-Tubuli sowie Membranumbauprozesse durch Interaktionen mit Dynamin, Phosphoinositiden und dem Aktin-Zytoskelett koordiniert. In menschlichen Zellen trägt BIN1 zur Homöostase von Transport und Signalgebung bei, indem es Vesikelabschnürung und zytoskelettale Organisation koppelt, wobei Isoformen kontextspezifische Funktionen in Muskel- und Nervensystem ausüben. Genetische und expressionsbezogene Veränderungen von BIN1 wurden mit Myopathien, einschließlich der zentronukleären Myopathie, in Verbindung gebracht; außerdem ist BIN1 an neurodegenerationsrelevanten Signalwegen beteiligt, etwa am endosomalen Transport und an amyloidassoziierten Prozessen, die für die Alzheimer-Krankheit relevant sind. Diese Funktionen machen Amphiphysin II zu einem geeigneten Knotenpunkt für die Untersuchung von Membrandynamik, Synapsenbiologie und der Architektur von Muskelzellen.

Das Amphiphysin II CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des BIN1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des BIN1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von BIN1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Amphiphysin II-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von BIN1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Amphiphysin II-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf BIN1-Exone abzielen, die für die Amphiphysin II-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere BIN1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Amphiphysin II CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Amphiphysin II CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des BIN1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Amphiphysin II HDR-Plasmid (h) und Amphiphysin II HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von BIN1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten BIN1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.