Plasmide Double Nickase (h) Amphiphysin I: sc-403904-NIC

Le gène humain **AMPH** code l’amphiphysine I, un adaptateur contenant un domaine BAR qui façonne les membranes et coordonne l’endocytose médiée par la clathrine en couplant la fission des vésicules dépendante de la dynamine au remodelage de l’actine. L’amphiphysine I participe au recyclage des vésicules synaptiques et aux voies d’internalisation des récepteurs grâce à des interactions avec la clathrine, AP-2 et des partenaires se liant aux domaines SH3, favorisant ainsi une neurotransmission efficace et le trafic membranaire. La dérégulation de la machinerie endocytaire et de l’homéostasie synaptique impliquant **AMPH** est pertinente pour l’étude des maladies neurodégénératives et d’autres troubles neurologiques dans lesquels le recyclage vésiculaire, le renouvellement des protéines et le trafic des récepteurs de signalisation sont perturbés. **AMPH** est donc largement utilisé comme nœud mécanistique pour explorer la détection de la courbure membranaire, le trafic endosomal et les réponses au stress cellulaire associées à la synapse.

Amphiphysin I Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus AMPH dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de AMPH. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de AMPH. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de AMPH.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.