Aminoacylase-1 Double Nickase Plasmid (h): sc-408464-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Aminoacylase-1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Aminoacylase-1 Double-Nickase-Plasmid (h) und Aminoacylase-1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ACY1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Aminoacylase-1: sc-271019
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Aminoacylase-1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-408464-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Aminoacylase-1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-408464-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Humanes ACY1 kodiert Aminoacylase‑1, eine zinkabhängige zytosolische Hydrolase, die N‑acetylierte Aminosäuren deacetylisiert und dadurch freie Aminosäuren für die zelluläre Wiederverwertung freisetzt. Diese Aktivität trägt zur Aminosäurehomöostase und zum Stickstoffstoffwechsel bei und ist in vielen Geweben mit übergeordneten Programmen der Proteostase und metabolischen Anpassung verknüpft. Eine veränderte ACY1‑Funktion wurde mit angeborenen Stoffwechselstörungen in Verbindung gebracht, die die Verarbeitung von N‑Acetylaminosäuren betreffen, und wurde in Kontexten untersucht, in denen metabolische Umprogrammierung und proteolytischer Umsatz den Zellzustand beeinflussen. Dadurch ist ACY1 ein nützlicher Knotenpunkt zur Untersuchung zytosolischer Deacylierungschemie, von Metabolitenflüssen und der nachgelagerten Auswirkungen auf zelluläre Fitness und Stressantworten.
Aminoacylase-1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ACY1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ACY1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ACY1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ACY1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.