AMDHD2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-434174

Übersicht

Amdhd2 kodiert „amidohydrolase domain containing 2“ (AMDHD2), eine zytosolische, metallabhängige Deacetylase, die am Aminozuckerstoffwechsel beteiligt ist, indem sie Deacetylierungsschritte katalysiert, die mit der Nutzung von N‑Acetylglucosamin (GlcNAc) verknüpft sind. Über seine Rolle bei der Verarbeitung von aus Glucosamin abgeleiteten Zwischenprodukten kann AMDHD2 die zelluläre Nährstoffsensorik sowie Signalwege beeinflussen, die mit dem Hexosaminfluss zusammenhängen, der wiederum die Glykosylierungskapazität und die metabolische Homöostase berührt. Eine veränderte Regulation des Aminozuckerstoffwechsels wurde in Säugerzellen mit Änderungen der Proliferation, von Stressantworten und Differenzierungsprogrammen in Verbindung gebracht. In Mausmodellen bietet eine Störung von Amdhd2 einen genetischen Ansatzpunkt, um zu untersuchen, wie GlcNAc-bezogener Stoffwechsel zur Gewebephysiologie und zu krankheitsrelevanten metabolischen Phänotypen beiträgt.

Das AMDHD2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Amdhd2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Amdhd2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Amdhd2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die AMDHD2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Amdhd2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der AMDHD2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Amdhd2-Exone abzielen, die für die AMDHD2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Amdhd2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom AMDHD2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom AMDHD2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Amdhd2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das AMDHD2 HDR-Plasmid (m) und AMDHD2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Amdhd2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Amdhd2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.