ALR Double Nickase Plasmid (h): sc-403367-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ALR Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ALR Double-Nickase-Plasmid (h) und ALR Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GFER abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ALR: sc-365885
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ALR Double Nickase Plasmid (h) | sc-403367-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
ALR Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403367-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane GFER-Gen kodiert den Augmenter of Liver Regeneration (ALR), eine Sulfhydryl-Oxidase, die vorwiegend im mitochondrialen Intermembranraum lokalisiert ist und über die MIA40–GFER-Disulfid-Relaiskette die oxidative Proteinfaltung unterstützt. Durch die Förderung des Imports und der Reifung cysteinreicher mitochondrialer Proteine trägt ALR zur Aufrechterhaltung der Atmungskette, zur Redox-Homöostase und zur mitochondrialen Integrität bei und beeinflusst damit den Energiestoffwechsel sowie Stressantworten. Die GFER-Aktivität greift über mitochondriale Signalwege und den Umgang mit reaktiven Sauerstoffspezies in die Regulation der Apoptose und der Zellproliferation ein. Eine Dysregulation von ALR/GFER wurde mit Phänotypen mitochondrialer Dysfunktion in Verbindung gebracht und wird häufig im Kontext der Leberbiologie, der Neuroentwicklung sowie von Erkrankungen untersucht, die mit gestörter Proteostase und Redox-Ungleichgewicht einhergehen.
ALR Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GFER-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GFER abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GFER-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GFER-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.