Partículas Lentivirales de Activación (m) alpha 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1A1: sc-419236-LAC

Atp1a1 de ratón codifica la subunidad catalítica alfa 1 de la Na⁺/K⁺-ATPasa, una ATPasa de tipo P que utiliza la hidrólisis de ATP para mantener los gradientes transmembrana de Na⁺ y K⁺, esenciales para el potencial de membrana en reposo, el equilibrio osmótico y el transporte activo secundario. Más allá de la homeostasis iónica, ATP1A1 participa en procesos de señalización vinculados a microdominios de la membrana, incluido el diálogo cruzado con quinasas de la familia Src y vías posteriores relacionadas con MAPK/ERK que pueden influir en la proliferación y las respuestas al estrés. La alteración de la función de la Na⁺/K⁺-ATPasa se utiliza ampliamente para estudiar la excitabilidad, el transporte epitelial y el acoplamiento metabólico, y ofrece puntos de entrada mecanísticos a fenotipos relevantes para enfermedades como la disfunción cardiometabólica, los trastornos de excitabilidad neurológica y los defectos de transporte tubular renal. En sistemas murinos, Atp1a1 también se emplea como un marcador robusto de la integridad de la membrana plasmática y como determinante de la sensibilidad a los glucósidos cardiacos en estudios de vías.

Las partículas de activación lentiviral alpha 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1A1 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Atp1a1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral alpha 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1A1 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Atp1a1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de alpha 1 Sodium Potassium ATPase/ATP1A1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Atp1a1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.