ALP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401877

Übersicht

PDLIM3 kodiert ALP (actinin-assoziiertes LIM-Protein), ein Adaptorprotein der PDZ-LIM-Familie, das in quergestreifter Muskulatur angereichert ist, am Z-Streifen lokalisiert und α-Actinin-basierte Aktinfilamente mit Signalkomplexen verknüpft. Über seine PDZ- und LIM-Domänen unterstützt ALP den Aufbau des Sarkomers, die Mechanotransduktion und die Organisation des Zytoskeletts, indem es als Gerüst (Scaffold) für Proteininteraktionen dient, die die Aktindynamik und stressresponsive Signalwege koordinieren. Eine veränderte PDLIM3-Expression oder eine Störung der Z-Streifen-Integrität wird mit beeinträchtigter myofibrillärer Architektur in Verbindung gebracht und wurde im Kontext von Kardiomyopathien und Skelettmuskeldysfunktionen untersucht. Als Marker der strukturellen Homöostase der Muskulatur ist ALP relevant, um zu erforschen, wie zytoskelettale Gerüststrukturen die Kontraktionsfunktion, Zelladhäsion und Stresssignalgebung feinabstimmen.

Das ALP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PDLIM3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PDLIM3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PDLIM3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ALP-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PDLIM3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ALP-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PDLIM3-Exone abzielen, die für die ALP-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PDLIM3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ALP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ALP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PDLIM3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ALP HDR-Plasmid (h) und ALP HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PDLIM3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PDLIM3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.