Plasmide CRISPR/Cas9 KO Alox12e (m): sc-419087

Présentation

Alox12e code la 12R‑lipoxygénase de l’acide arachidonique (arachidonate 12‑lipoxygenase, 12R‑type), une dioxygénase à fer non hémique qui catalyse l’oxygénation d’acides gras polyinsaturés afin de générer des médiateurs lipidiques bioactifs. Dans l’épiderme murin, Alox12e agit au sein de la voie des lipoxygénases et coopère avec des enzymes apparentées dans le traitement oxydatif des lipides, un processus qui soutient la différenciation des kératinocytes et la formation de la barrière de la couche cornée. En régulant les produits d’oxydation lipidique et les signalisations en aval, Alox12e contribue à l’homéostasie de la barrière, aux réponses inflammatoires et à la signalisation de stress dans la peau. La perturbation de cet axe est pertinente pour l’étude de défauts de barrière de type ichtyose, de l’inflammation associée à la dermatite et, plus largement, de phénotypes liés au métabolisme lipidique en biologie épithéliale.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Alox12e (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Alox12e dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Alox12e, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Alox12e à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Alox12e.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Alox12e pour l'étude de la signalisation de Alox12e, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Alox12e essentiels à la fonction de Alox12e
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Alox12e pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Alox12e plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Alox12e plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Alox12e. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Alox12e plasmide HDR (m) et le Alox12e (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Alox12e pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Alox12e définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.