Alox12e Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419087

Descripción general

Alox12e codifica la araquidonato 12-lipooxigenasa, tipo 12R, una dioxigenasa con hierro no hemo que cataliza la oxigenación de ácidos grasos poliinsaturados para generar mediadores lipídicos bioactivos. En la epidermis del ratón, Alox12e actúa dentro de la vía de las lipooxigenasas y coopera con enzimas relacionadas en el procesamiento oxidativo de lípidos que sustenta la diferenciación de los queratinocitos y la formación de la barrera del estrato córneo. Mediante la regulación de los productos de oxidación lipídica y de la señalización aguas abajo, Alox12e contribuye a la homeostasis de la barrera, a las respuestas inflamatorias y a la señalización de estrés en la piel. La alteración de este eje es relevante para estudios de defectos de barrera tipo ictiosis, inflamación asociada a dermatitis y fenotipos más amplios del metabolismo lipídico en la biología epitelial.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Alox12e (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Alox12e en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Alox12e junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Alox12e tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Alox12e.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Alox12e para la investigación de la señalización de Alox12e, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Alox12e críticos para la función de Alox12e
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Alox12e para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Alox12e CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Alox12e CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Alox12e. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Alox12e (m) y el plásmido HDR Alox12e (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Alox12e para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Alox12e definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.