Aldolase C CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400988

Übersicht

ALDOC kodiert die Aldolase C, eine Fructose-bisphosphat-Aldolase-Isoform, die einen zentralen reversiblen Schritt in Glykolyse und Glukoneogenese katalysiert, indem sie Fructose-1,6-bisphosphat in Glycerinaldehyd-3-phosphat und Dihydroxyacetonphosphat umwandelt. In menschlichen Geweben ist ALDOC besonders im zentralen Nervensystem angereichert und trägt zum neuronalen Energiestoffwechsel bei, indem es den glykolytischen Fluss mit dem Redoxgleichgewicht und dem Bedarf an Biosynthese koppelt. Über seine metabolische Funktion hinaus wird Aldolase C mit der Regulation der Zytoskelettorganisation und zellulären Stressantworten über metabolitensensitive Signalnetzwerke in Verbindung gebracht. Veränderte ALDOC-Expression oder -Aktivität wird häufig im Zusammenhang mit neurologischer Vulnerabilität und der in diversen Krankheitsbildern beobachteten metabolischen Reprogrammierung untersucht und bietet einen mechanistischen Ansatzpunkt für die Untersuchung von Signalwegen in Zell- und Gewebemodellen.

Das Aldolase C CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ALDOC-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ALDOC-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ALDOC nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Aldolase C-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ALDOC-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Aldolase C-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ALDOC-Exone abzielen, die für die Aldolase C-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ALDOC-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Aldolase C CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Aldolase C CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ALDOC-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Aldolase C HDR-Plasmid (h) und Aldolase C HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ALDOC-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ALDOC-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.