Plasmide CRISPR/Cas9 KO Aldolase A (m): sc-419082

Présentation

Aldoa code l’aldolase A, une enzyme glycolytique qui catalyse le clivage réversible du fructose-1,6-bisphosphate en glycéraldéhyde-3-phosphate et phosphate de dihydroxyacétone, reliant l’utilisation du glucose à la production d’ATP et à la génération de précurseurs biosynthétiques. Dans les cellules de souris, l’aldolase A soutient le flux métabolique à travers la glycolyse et s’inscrit dans des programmes plus larges de métabolisme du carbone qui influencent l’équilibre rédox et la prolifération cellulaire. Au-delà du métabolisme, l’aldolase A a été impliquée dans l’organisation du cytosquelette via des interactions avec la dynamique de l’actine, reliant la production d’énergie à la forme cellulaire et à la motilité. Des modifications de l’expression d’ALDOA et un remaniement de la glycolyse sont fréquemment étudiés dans des contextes de stress métabolique et de phénotypes associés aux maladies, notamment l’adaptation métabolique liée aux tumeurs et des déficits fonctionnels touchant le muscle.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Aldolase A (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Aldoa dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Aldoa, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Aldoa à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Aldolase A.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Aldoa pour l'étude de la signalisation de Aldolase A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Aldoa essentiels à la fonction de Aldolase A
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Aldoa pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Aldolase A plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Aldolase A plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Aldoa. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Aldolase A plasmide HDR (m) et le Aldolase A (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Aldoa pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Aldoa définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.