Aldehyde dehydrogenase 8-A1/ALDH8A1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406326

Übersicht

Das humane Gen **ALDH8A1** kodiert die Aldehyddehydrogenase 8-A1, ein **NAD(P)+-abhängiges** Enzym, das reaktive Aldehyde zu den entsprechenden Säuren oxidiert und damit zur zellulären Aldehyd-Detoxifikation sowie zur **Redox-Homöostase** beiträgt. Die Aktivität von ALDH8A1 ist mit Stoffwechselwegen verknüpft, die Aldehyde aus der **Lipidperoxidation** sowie allgemeinere **Carbonylstress**-Antworten verarbeiten, und hilft so, die Bildung aldehydvermittelter Protein- und DNA-Addukte zu begrenzen. Eine Dysregulation von Enzymen der Aldehyddehydrogenase-Familie ist in zahlreichen Krankheitskontexten mit veränderter Toleranz gegenüber oxidativem Stress, metabolischer Umprogrammierung und einer erhöhten Anfälligkeit für Schäden durch elektrophile Verbindungen assoziiert. In der biomedizinischen Forschung wird ALDH8A1 hinsichtlich seines Einflusses auf den mitochondrialen und zytosolischen Stoffwechsel, Stress-Signalwege und die zelluläre Fitness unter Bedingungen untersucht, die die endogene Aldehydbelastung erhöhen.

Das Aldehyde dehydrogenase 8-A1/ALDH8A1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ALDH8A1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ALDH8A1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ALDH8A1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Aldehyde dehydrogenase 8-A1/ALDH8A1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ALDH8A1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Aldehyde dehydrogenase 8-A1/ALDH8A1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ALDH8A1-Exone abzielen, die für die Aldehyde dehydrogenase 8-A1/ALDH8A1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ALDH8A1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Aldehyde dehydrogenase 8-A1/ALDH8A1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Aldehyde dehydrogenase 8-A1/ALDH8A1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ALDH8A1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Aldehyde dehydrogenase 8-A1/ALDH8A1 HDR-Plasmid (h) und Aldehyde dehydrogenase 8-A1/ALDH8A1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ALDH8A1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ALDH8A1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.