Aldehyde dehydrogenase 6-A1/ALDH6A1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406553

Übersicht

Das humane Gen **ALDH6A1** kodiert die mitochondriale **Methylmalonat-Semialdehyd-Dehydrogenase**, ein NAD(P)+-abhängiges Enzym, das während des Abbaus von Valin und Pyrimidinen Methylmalonat-Semialdehyd zu **Propionyl‑CoA** oxidiert. Indem es Kohlenstoff in den Propionyl‑CoA‑Stoffwechsel und nachgeschaltete anaplerotische Wege einspeist, verknüpft ALDH6A1 den Umsatz verzweigtkettiger Aminosäuren mit der mitochondrialen Energiehomöostase und dem Redoxgleichgewicht. Störungen der ALDH6A1‑Aktivität können Profile organischer Säuren und mitochondriale Stressantworten verändern und sind daher für Studien zu angeborenen Stoffwechselstörungen sowie zu breiteren Phänotypen mitochondrialer Dysfunktion relevant. Auch im Kontext metabolischer Reprogrammierung sind Expression und Funktion von Interesse, wenn der Aminosäurekatabolismus proliferative oder stressadaptierte Zustände unterstützt.

Das Aldehyde dehydrogenase 6-A1/ALDH6A1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ALDH6A1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ALDH6A1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ALDH6A1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Aldehyde dehydrogenase 6-A1/ALDH6A1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ALDH6A1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Aldehyde dehydrogenase 6-A1/ALDH6A1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ALDH6A1-Exone abzielen, die für die Aldehyde dehydrogenase 6-A1/ALDH6A1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ALDH6A1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Aldehyde dehydrogenase 6-A1/ALDH6A1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Aldehyde dehydrogenase 6-A1/ALDH6A1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ALDH6A1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Aldehyde dehydrogenase 6-A1/ALDH6A1 HDR-Plasmid (h) und Aldehyde dehydrogenase 6-A1/ALDH6A1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ALDH6A1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ALDH6A1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.