Plasmide CRISPR/Cas9 KO Aldehyde dehydrogenase 5-A1/SSADH/ALDH5A1 (h): sc-406757

Présentation

ALDH5A1 code la déshydrogénase du succinate semi‑aldéhyde (SSADH), une enzyme mitochondriale NAD+-dépendante qui catalyse l’oxydation du succinate semi‑aldéhyde en succinate, reliant le catabolisme du GABA au cycle de l’acide tricarboxylique (cycle TCA). En contrôlant le flux à travers la voie de dérivation du GABA (GABA shunt), ALDH5A1 contribue à réguler l’équilibre rédox cellulaire, le métabolisme mitochondrial et le renouvellement des neurotransmetteurs dans les tissus neuronaux. Une altération de l’activité de la SSADH est associée à l’accumulation de métabolites dérivés du GABA et à une modification de la transmission inhibitrice, et ALDH5A1 a été étudié dans le contexte d’erreurs innées du métabolisme affectant le système nerveux. Ces caractéristiques font d’ALDH5A1 une cible utile pour explorer les interactions métaboliques entre la fonction mitochondriale et les voies des neurotransmetteurs.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Aldehyde dehydrogenase 5-A1/SSADH/ALDH5A1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ALDH5A1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ALDH5A1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ALDH5A1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Aldehyde dehydrogenase 5-A1/SSADH/ALDH5A1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ALDH5A1 pour l'étude de la signalisation de Aldehyde dehydrogenase 5-A1/SSADH/ALDH5A1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ALDH5A1 essentiels à la fonction de Aldehyde dehydrogenase 5-A1/SSADH/ALDH5A1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ALDH5A1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Aldehyde dehydrogenase 5-A1/SSADH/ALDH5A1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Aldehyde dehydrogenase 5-A1/SSADH/ALDH5A1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ALDH5A1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Aldehyde dehydrogenase 5-A1/SSADH/ALDH5A1 plasmide HDR (h) et le Aldehyde dehydrogenase 5-A1/SSADH/ALDH5A1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ALDH5A1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ALDH5A1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.