Aldehyde dehydrogenase 5-A1/SSADH/ALDH5A1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406757

Übersicht

ALDH5A1 kodiert die Succinylsemialdehyd-Dehydrogenase (SSADH), ein mitochondriales, NAD+-abhängiges Enzym, das die Oxidation von Succinylsemialdehyd zu Succinat katalysiert und damit den GABA-Abbau mit dem Tricarbonsäure-(TCA-)Zyklus verknüpft. Durch die Steuerung des Stoffflusses über den GABA-Shunt trägt ALDH5A1 zur Regulation des zellulären Redoxgleichgewichts, des mitochondrialen Stoffwechsels und des Neurotransmitterumsatzes in neuronalen Geweben bei. Eine Störung der SSADH-Aktivität wird mit der Anreicherung von GABA-abgeleiteten Metaboliten und veränderter inhibitorischer Signalübertragung in Verbindung gebracht, und ALDH5A1 wurde im Kontext angeborener Stoffwechselstörungen untersucht, die das Nervensystem betreffen. Diese Eigenschaften machen ALDH5A1 zu einem nützlichen Ziel, um den metabolischen Crosstalk zwischen mitochondrialer Funktion und Neurotransmitterwegen zu untersuchen.

Das Aldehyde dehydrogenase 5-A1/SSADH/ALDH5A1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ALDH5A1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ALDH5A1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ALDH5A1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Aldehyde dehydrogenase 5-A1/SSADH/ALDH5A1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ALDH5A1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Aldehyde dehydrogenase 5-A1/SSADH/ALDH5A1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ALDH5A1-Exone abzielen, die für die Aldehyde dehydrogenase 5-A1/SSADH/ALDH5A1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ALDH5A1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Aldehyde dehydrogenase 5-A1/SSADH/ALDH5A1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Aldehyde dehydrogenase 5-A1/SSADH/ALDH5A1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ALDH5A1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Aldehyde dehydrogenase 5-A1/SSADH/ALDH5A1 HDR-Plasmid (h) und Aldehyde dehydrogenase 5-A1/SSADH/ALDH5A1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ALDH5A1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ALDH5A1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.