Aldehyde dehydrogenase 4-A1/P5CDH/ALDH4A1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-431814

Übersicht

Das murine Gen *Aldh4a1* kodiert die Aldehyddehydrogenase 4-A1 (P5CDH/ALDH4A1), ein mitochondriales Enzym, das in den terminalen Schritten des Prolin- und Hydroxyprolinabbaus die Umwandlung von Δ1-Pyrrolin-5-carboxylat zu Glutamat katalysiert. Durch die Steuerung des Flusses zwischen Prolinmetabolismus, Glutamatproduktion und mitochondrialem Redoxgleichgewicht beeinflusst ALDH4A1 die Aminosäurehomöostase und die Entgiftung reaktiver Aldehyde. Störungen dieses Signal- bzw. Stoffwechselwegs stehen mit einer veränderten Bewältigung oxidativen Stresses und mitochondrialer Dysfunktion in Zusammenhang, was *Aldh4a1* zu einem nützlichen Ansatzpunkt für die Untersuchung metabolischer Stressantworten macht. Die Aktivität von ALDH4A1 ist über den glutamatabhängigen Eintritt in den Citratzyklus zudem mit übergeordneten Nährstoffsensorik- und anaplerotischen Prozessen verknüpft.

Das Aldehyde dehydrogenase 4-A1/P5CDH/ALDH4A1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Aldh4a1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Aldh4a1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Aldh4a1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Aldehyde dehydrogenase 4-A1/P5CDH/ALDH4A1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Aldh4a1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Aldehyde dehydrogenase 4-A1/P5CDH/ALDH4A1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Aldh4a1-Exone abzielen, die für die Aldehyde dehydrogenase 4-A1/P5CDH/ALDH4A1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Aldh4a1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Aldehyde dehydrogenase 4-A1/P5CDH/ALDH4A1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Aldehyde dehydrogenase 4-A1/P5CDH/ALDH4A1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Aldh4a1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Aldehyde dehydrogenase 4-A1/P5CDH/ALDH4A1 HDR-Plasmid (m) und Aldehyde dehydrogenase 4-A1/P5CDH/ALDH4A1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Aldh4a1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Aldh4a1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.