Aldehyde dehydrogenase 1-A3/ALDH1A3 Double Nickase Plasmid (h): sc-401630-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Aldehyde dehydrogenase 1-A3/ALDH1A3 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Aldehyde dehydrogenase 1-A3/ALDH1A3 Double-Nickase-Plasmid (h) und Aldehyde dehydrogenase 1-A3/ALDH1A3 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ALDH1A3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Aldehyde dehydrogenase 1-A3/ALDH1A3 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401630-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Aldehyde dehydrogenase 1-A3/ALDH1A3 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401630-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane Gen **ALDH1A3** codiert für die zytosolische Aldehyddehydrogenase 1-A3, ein NAD(P)+-abhängiges Enzym, das ein breites Spektrum reaktiver Aldehyde oxidiert und über den Metabolismus von Retinaldehyd zur Biosynthese von Retinsäure beiträgt. Durch die Regulation der Aldehyd-Entgiftung und der Retinoid-Signalübertragung beeinflusst ALDH1A3 das zelluläre Redoxgleichgewicht, Differenzierungsprogramme sowie retinsäure-responsive Transkriptionsnetzwerke. Eine veränderte ALDH1A3-Expression wurde in zahlreichen Tumorkontexten beschrieben und wird häufig als Marker verwendet, der mit dem Linien-/Zellzustand und dem Aldehydstoffwechsel assoziiert ist; dies motiviert mechanistische Studien dazu, wie dieses Enzym proliferative und stressadaptive Phänotypen prägt. Diese Funktionen verknüpfen ALDH1A3 mit Signalwegen, die den Umgang mit oxidativem Stress, metabolische Umprogrammierung und entwicklungsbezogene Genregulation steuern.
Aldehyde dehydrogenase 1-A3/ALDH1A3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ALDH1A3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ALDH1A3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ALDH1A3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ALDH1A3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.