ALB/Albumin CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400269-ACT

ALB kodiert Albumin, das am häufigsten vorkommende Plasmaprotein, das von Hepatozyten synthetisiert und in den Blutkreislauf sezerniert wird. Dort erhält es den kolloidosmotischen Druck aufrecht und dient als wichtiger Transportträger für Fettsäuren, Bilirubin, Hormone und viele kleine Moleküle. Albumin ist an systemischen Transportprozessen von Nährstoffen und Metaboliten beteiligt, beeinflusst über eine cysteinbasierte Thiol-Pufferung das Redoxgleichgewicht und trägt zur Verfügbarkeit extrazellulärer Liganden bei, die die hepatische metabolische Signalgebung mitprägen kann. Die ALB-Expression ist eng an Differenzierungsprogramme von Hepatozyten und leberspezifische transkriptionelle Netzwerke gekoppelt und wird daher häufig als Marker für hepatische Identität und Funktion verwendet. Veränderte Albuminspiegel und eine dysregulierte ALB-Transkription sind häufig mit Leberfunktionsstörungen assoziiert und werden in Studien zu Leberschädigung, Fibrose und Mechanismen metabolischer Erkrankungen oft mitüberwacht.

ALB/Albumin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ALB-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ALB/Albumin Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ALB-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ALB-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ALB/Albumin-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ALB-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ALB/Albumin-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ALB/Albumin-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ALB-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.