ALAS-E Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403752

Descripción general

ALAS2 codifica la 5‑aminolevulinato sintasa específica de la línea eritroide (ALAS‑E), una enzima mitocondrial dependiente de fosfato de piridoxal que cataliza el primer paso y el paso limitante de la velocidad de la biosíntesis del hemo, mediante la condensación de glicina y succinil‑CoA para formar 5‑aminolevulinato. Su actividad integra el metabolismo mitocondrial con la diferenciación eritroide y la hemoglobinización, favoreciendo el uso del hierro y la producción de porfirinas en los eritrocitos en desarrollo. ALAS‑E está regulada por programas transcripcionales eritroides y por la disponibilidad de hemo/hierro, lo que la vincula a vías que controlan la función mitocondrial y el estrés oxidativo en los eritroblastos. La alteración genética o funcional de ALAS2 se asocia con trastornos en la síntesis de porfirinas/hemo y puede investigarse en modelos de maduración eritroide y fisiopatología de los glóbulos rojos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ALAS-E (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ALAS2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ALAS2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ALAS2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ALAS-E.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ALAS2 para la investigación de la señalización de ALAS-E, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de ALAS2 críticos para la función de ALAS-E
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ALAS2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ALAS-E CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido ALAS-E CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ALAS2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ALAS-E (h) y el plásmido HDR ALAS-E (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ALAS2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ALAS2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.