Akt1 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-419071-ACT

マウス Akt1 は、細胞の生存、グルコース代謝、タンパク質合成、および細胞周期の進行を協調的に制御する PI3K シグナル伝達の中核的エフェクターとして機能するセリン／スレオニンキナーゼ AKT1 をコードします。受容体型チロシンキナーゼやインスリン／IGF 経路の下流で活性化されると、AKT1 は mTORC1 活性、FOXO 転写因子、ならびに GSK3 依存性プロセスを制御する標的をリン酸化し、同化的な成長とストレス応答を形作ります。Akt1 活性は、MAPK シグナルやフォーカルアドヒージョン（接着斑）シグナルとのクロストークを介して、細胞骨格の再編成や細胞移動にも影響します。AKT1 シグナルの破綻は、がん性増殖プログラム、インスリン抵抗性、炎症性表現型に広く関与しており、マウス疾患モデルにおける経路解析の重要な結節点となっています。

Akt1 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Akt1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Akt1 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Akt1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はAkt1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Akt1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のAkt1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるAkt1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびAkt1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるAkt1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。