Partículas Lentivirales de Activación (h) AKR1A1: sc-416233-LAC

AKR1A1 codifica el miembro A1 de la familia de aldo-ceto reductasas 1, una oxidorreductasa citosólica dependiente de NADPH que reduce una variedad de aldehídos endógenos y xenobióticos. Esta enzima contribuye a la homeostasis redox celular y a la desintoxicación de carbonilos, y se solapa con las vías del metabolismo de aldehídos y de respuesta al estrés oxidativo. Al limitar la acumulación de aldehídos reactivos generados durante la peroxidación lipídica, AKR1A1 puede influir en la formación de aductos con proteínas y ADN y en la señalización inflamatoria posterior. La actividad o expresión alteradas de AKR1A1 se han estudiado en el contexto del estrés metabólico y de trastornos asociados a una alta carga de carbonilos, incluidas las complicaciones diabéticas y otras afecciones vinculadas al daño oxidativo.

Las partículas de activación lentiviral AKR1A1 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de AKR1A1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral AKR1A1 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción AKR1A1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de AKR1A1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo AKR1A1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.