AKAP 79 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402647

概要

AKAP5はAKAP 79をコードしており、AKAP 79は膜関連型のA-キナーゼアンカリングタンパク質（AKAP）として、カルシニューリンやPP2Bなどのホスファターゼと並んでPKAを特定の細胞内マイクロドメインに係留し、多タンパク質からなるシグナル伝達複合体を編成します。キナーゼ、ホスファターゼ、受容体を足場化することで、AKAP 79はシナプス可塑性、受容体トラフィッキング、活動依存的リン酸化を制御する経路（カルシウムおよびcAMP制御過程を含む）において、シグナルの強度と持続時間を規定します。ニューロンや興奮性組織では、この空間的制御がイオンチャネルの調節や下流の転写応答に影響します。AKAP 79シグナルの破綻は神経興奮性やネットワーク機能の変化に関与することが示唆されており、AKAP5は神経疾患の病態生物学やストレス応答性シグナルに関連する機構を研究するうえで有用な結節点となります。

AKAP 79 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるAKAP5遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、AKAP5内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、AKAP5のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、AKAP 79タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、AKAP 79シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、AKAP5欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• AKAP 79の機能に不可欠なAKAP5エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、AKAP5ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• AKAP 79 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびAKAP 79 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、AKAP5遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  AKAP 79 HDRプラスミド（h）および AKAP 79 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAKAP5ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAKAP5標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。