Particules Lentivirales d'Activation (h) AK4: sc-416951-LAC

AK4 humain code l’adénylate kinase 4, une enzyme mitochondriale qui régule l’homéostasie des nucléotides adényliques en catalysant un transfert réversible de phosphate entre l’AMP, l’ADP et l’ATP. En contribuant au maintien de l’équilibre énergétique cellulaire, AK4 influence le métabolisme mitochondrial, les réponses au stress oxydant et des processus liés à l’apoptose qui relient l’état bioénergétique aux décisions de survie cellulaire. Une expression altérée d’AK4 a été associée à la reprogrammation métabolique et à l’adaptation au stress observées dans plusieurs contextes pathologiques, notamment en cancérologie et dans des modèles de lésions tissulaires. En tant que régulateur mitochondrial, AK4 est fréquemment étudiée dans des voies liées à la signalisation de l’hypoxie, à la gestion des espèces réactives de l’oxygène et au contrôle qualité mitochondrial.

Les particules d'activation lentivirales AK4 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de AK4 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales AK4 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription AK4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de AK4. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif AK4 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.