AK1 Double Nickase Plasmid (h): sc-407286-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das AK1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- AK1 Double-Nickase-Plasmid (h) und AK1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf AK1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: AK1: sc-365316
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
AK1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-407286-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
AK1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-407286-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Adenylatkinase 1 (AK1) ist eine zytosolische Phosphotransferase, die die Homöostase der Adeninnukleotide aufrechterhält, indem sie die reversible Umwandlung von ATP und AMP in zwei Moleküle ADP katalysiert und so eine schnelle Energiebufferung in Zellen mit schwankendem Bedarf unterstützt. Durch die Beeinflussung lokaler ATP/ADP/AMP-Verhältnisse wirkt AK1 auf metabolische Kontrollpunkte, die mit Glykolyse, oxidativer Phosphorylierung und AMP-sensitiver Signalgebung verbunden sind, einschließlich der Wechselwirkungen mit zellulären Energie-Stressantworten. Die AK1-Aktivität ist besonders relevant in Geweben mit hohem Energieumsatz wie Muskel und Erythrozyten, wo Störungen des Nukleotidgleichgewichts die Kontraktilität und die Stabilität roter Blutkörperchen beeinträchtigen können. Variationen in der AK1-Expression oder -Funktion wurden im Zusammenhang mit metabolischen Phänotypen und Erkrankungen untersucht, die mit einer Dysregulation des Energiestoffwechsels einhergehen, und bieten einen mechanistischen Ansatzpunkt für die Erforschung des Nukleotidstoffwechsels in menschlichen Zellen.
AK1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des AK1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von AK1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die AK1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit AK1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.