Plásmido Doble Nickase (h) AIP5: sc-403772-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)AIP5 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa AIP5 (h) y el plásmido de doble nickasa AIP5 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a WWP1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: AIP5 Anticuerpo (F-3): sc-390897
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) AIP5 | sc-403772-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) AIP5 | sc-403772-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
WWP1 codifica la ligasa E3 de ubiquitina-proteína humana AIP5, una enzima con dominio HECT que ubiquitina diversos sustratos para regular la estabilidad de las proteínas, su tráfico intracelular y la intensidad de las señales. Mediante el reconocimiento de motivos PPxY a través de sus dominios WW, AIP5 ayuda a ajustar vías que controlan el crecimiento celular, la polaridad y las respuestas al estrés, incluida la modulación de la señalización cercana al receptor y el recambio de proteínas reguladoras. La actividad desregulada de WWP1/AIP5 se ha asociado con una homeostasis de la ubiquitina alterada y programas de señalización anómalos implicados en la transformación oncogénica y en fenotipos del desarrollo. En consecuencia, WWP1 se estudia con frecuencia para analizar cómo la proteostasis mediada por ubiquitina se integra con la proliferación, la migración y la reconfiguración de vías en células humanas.
AIP5 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus WWP1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de WWP1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de WWP1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con WWP1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.