Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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AIP5 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403772
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- AIP5 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico AIP5, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: AIP5 Anticuerpo (F-3): sc-390897
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
AIP5 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-403772 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
WWP1 codifica la ligasa E3 de ubiquitina de tipo HECT AIP5, una enzima reguladora que cataliza la transferencia de ubiquitina a proteínas diana para controlar su estabilidad, localización y salida de señalización. AIP5 participa en la proteostasis dependiente de ubiquitina y puede influir en cascadas de señalización de receptores y quinasas, programas transcripcionales y respuestas celulares al estrés mediante la degradación selectiva de sustratos. Al modular el control de calidad proteica y los umbrales de señalización, la actividad de WWP1 se ha relacionado en la literatura con fenotipos celulares relevantes para la proliferación, la diferenciación y la homeostasis epitelial. La desregulación de vías de ligasas de ubiquitina que involucran a WWP1 se ha asociado con mecanismos relevantes para la enfermedad, incluidos cambios en la transducción de señales y redes aberrantes de degradación proteica estudiadas en oncología y otros trastornos complejos.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO AIP5 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen WWP1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del WWP1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de WWP1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína AIP5.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en WWP1 para la investigación de la señalización de AIP5, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de WWP1 críticos para la función de AIP5
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de WWP1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido AIP5 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido AIP5 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus WWP1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR AIP5 (h) y el plásmido HDR AIP5 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología WWP1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana WWP1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.