AIP4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421158

概要

Itch（AIP4）は、標的タンパク質のユビキチン化を触媒してその安定性や細胞内輸送を制御し、プロテオスタシスやシグナル持続時間を形成するHECT型E3ユビキチンリガーゼをコードします。マウス細胞では、AIP4は免疫シグナル伝達経路のユビキチン依存的な制御に関与し、NF-κBおよび関連する受容体近傍複合体の調節を含め、サイトカイン産生や炎症の恒常性に影響を与えます。Itchはまた、転写制御因子やシグナルアダプターのターンオーバーを介して、T細胞分化および末梢寛容にも寄与します。Itch活性の異常は、免疫バランスの破綻、炎症性表現型、ならびにがん生物学や神経免疫相互作用に関連する細胞増殖・生存経路の制御異常と関連づけられています。

AIP4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるItch遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Itch内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Itchのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、AIP4タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、AIP4シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Itch欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• AIP4の機能に不可欠なItchエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Itchゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• AIP4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびAIP4 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Itch遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  AIP4 HDRプラスミド（m）および AIP4 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはItchホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のItch標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。