Plasmide CRISPR/Cas9 KO Aiolos (h): sc-400764

Présentation

IKZF3 code Aiolos, un facteur de transcription à doigts de zinc de la famille Ikaros, qui régule la différenciation des lymphocytes et l’homéostasie immunitaire en contrôlant des programmes d’expression génique spécifiques de lignée. Aiolos module l’accessibilité de la chromatine ainsi que des réseaux de répression/activation transcriptionnelles qui façonnent la maturation des cellules B, le développement des plasmocytes et les états fonctionnels des cellules T, en intégrant des signaux en aval des voies des récepteurs de l’antigène. Une activité altérée d’IKZF3 a été associée à des réponses immunitaires dérégulées et à des décisions de destinée des cellules lymphoïdes perturbées, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de l’auto-immunité, de l’inflammation et de la biologie des hémopathies malignes. Dans les cellules humaines, les circuits transcriptionnels dépendants d’Aiolos influencent les sorties de signalisation des cytokines et le contrôle des programmes d’activation par rapport aux programmes de différenciation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Aiolos (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène IKZF3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du IKZF3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert IKZF3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Aiolos.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en IKZF3 pour l'étude de la signalisation de Aiolos, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de IKZF3 essentiels à la fonction de Aiolos
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de IKZF3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Aiolos plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Aiolos plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus IKZF3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Aiolos plasmide HDR (h) et le Aiolos (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie IKZF3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles IKZF3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.