Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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AIF Double Nickase Plasmid (h): sc-400370-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das AIF Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- AIF Double-Nickase-Plasmid (h) und AIF Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf AIFM1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: AIF: sc-13116
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
AIF Double Nickase Plasmid (h) | sc-400370-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
AIF Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400370-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane AIFM1 kodiert den Apoptose-induzierenden Faktor, mitochondrienassoziiert 1 (AIF), eine flavoproteinhaltige Oxidoreduktase, die im Intermembranraum der Mitochondrien lokalisiert ist und die Funktion der Atmungskette sowie die Redoxhomöostase unterstützt. Bei starkem zellulärem Stress kann AIF in den Zellkern translozieren und einen Caspase-unabhängigen Zelltod durch großflächige DNA-Fragmentierung und Chromatinkondensation fördern. AIFM1 ist damit zentral für die mitochondriale Qualitätskontrolle, Reaktionen auf oxidativen Stress und programmierte Zelltodwege, die mit bioenergetischem Versagen und neurodegenerativen Phänotypen verknüpft sind. Genetische und funktionelle Dysregulation von AIFM1 wurde mit mitochondrialen Enzephalomyopathien, peripheren Neuropathien sowie weiteren Kontexten in Verbindung gebracht, in denen eine beeinträchtigte oxidative Phosphorylierung und veränderte apoptotische Signalgebung zur Krankheitsbiologie beitragen.
AIF Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des AIFM1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von AIFM1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die AIFM1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit AIFM1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.