AICAR Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404771-ACT

O ATIC humano codifica a enzima bifuncional 5-aminoimidazol-4-carboxamida ribonucleotídeo formiltransferase/IMP ciclo-hidrolase (AICAR), que catalisa as duas etapas finais da biossíntese de purinas de novo, levando à produção de monofosfato de inosina (IMP). Por meio do seu papel na transferência de grupos formil dependente do metabolismo de um carbono e na manutenção do pool de nucleotídeos, o ATIC sustenta a síntese de DNA/RNA, a progressão do ciclo celular e a homeostase metabólica. A perturbação da atividade do ATIC pode afetar a capacidade proliferativa e as respostas ao estresse de replicação, ligando a desregulação da via de purinas ao metabolismo de células cancerígenas e a vulnerabilidades metabólicas mais amplas. Defeitos hereditários nessa via têm sido associados a fenótipos do neurodesenvolvimento e metabólicos, ressaltando a importância de um controle rigoroso da síntese de purinas.

AICAR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ATIC sem alterar a sequência de ADN subjacente.

AICAR O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ATIC em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ATIC, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de AICAR. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ATIC nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de AICAR no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via AICAR em células tumorais com expressão de ATIC silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.