Particules Lentivirales d'Activation (m) AHNAK: sc-425992-LAC

Ahnak code AHNAK, une grande protéine d’échafaudage associée à la membrane plasmique et au cytosquelette, qui coordonne l’architecture cellulaire, l’adhésion et l’intégration des signaux. Dans les cellules de souris, AHNAK a été impliquée dans l’homéostasie du calcium et les processus de réparation membranaire, et elle peut moduler des voies convergeant vers le remodelage du cytosquelette, notamment des signalisations associées à la PKC et au TGF-β. Par ces fonctions, AHNAK contribue à la régulation de la migration et de la différenciation cellulaires, ce qui la rend pertinente pour l’étude du remodelage tissulaire et des réponses au stress. Des modifications de l’expression ou de la localisation d’AHNAK ont été rapportées dans de multiples contextes pathologiques, ce qui soutient son utilisation comme nœud mécanistique pour disséquer les relations entre signalisation et structure dans des modèles de recherche biomédicale.

Les particules d'activation lentivirales AHNAK (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Ahnak dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales AHNAK (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Ahnak, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de AHNAK. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Ahnak ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.