AGXT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419052

Übersicht

Das murine Gen **Agxt** codiert die Alanin–Glyoxylat-Aminotransferase (AGXT), ein peroxisomales, PLP-abhängiges Enzym, das Glyoxylat zu Glycin umsetzt und den Aminosäureabbau mit der Entgiftung von Glyoxylat verknüpft. Diese Aktivität unterstützt die hepatische metabolische Homöostase, indem sie die Oxalatbildung begrenzt und peroxisomalen Redox- sowie Substratfluss mit dem mitochondrialen und zytosolischen Stoffwechsel integriert. Eine Störung der AGXT-Funktion ist mit Glyoxylatakkumulation und Phänotypen der Oxalatüberproduktion verbunden, die Signal- und Stoffwechselwege modellieren, welche an hyperoxalurieähnlichen metabolischen Störungen beteiligt sind. **Agxt** ist daher ein nützliches Ziel zur Untersuchung der Peroxisomenbiologie, metabolitengetriebenen oxidativen Stresses und von Genotyp–Stoffwechsel-Beziehungen in Mausmodellen.

Das AGXT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Agxt-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Agxt-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Agxt nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die AGXT-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Agxt-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der AGXT-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Agxt-Exone abzielen, die für die AGXT-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Agxt-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom AGXT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom AGXT CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Agxt-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das AGXT HDR-Plasmid (m) und AGXT HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Agxt-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Agxt-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.