Plasmide CRISPR/Cas9 KO AGTRAP (m): sc-419051

Présentation

Agtrap code la protéine associée au récepteur de l’angiotensine II (AGTRAP), un régulateur membranaire qui se lie à AGTR1 et influence le trafic du récepteur, son internalisation et la dynamique de la signalisation en aval. En modulant les voies dépendantes de l’angiotensine II, AGTRAP peut affecter la signalisation MAPK/ERK, les réponses au stress cellulaire et les programmes transcriptionnels inflammatoires, ce qui l’associe au maintien de l’homéostasie tissulaire dans les systèmes cardiovasculaire et rénal. Dans des modèles murins, des modifications de l’activité d’Agtrap ont été utilisées pour étudier les mécanismes impliqués dans la régulation de la pression artérielle, le remodelage vasculaire et la fonction rénale. Ces propriétés font d’AGTRAP un nœud utile pour étudier la régulation des GPCR et la signalisation du système rénine–angiotensine dans des types cellulaires physiologiquement pertinents.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO AGTRAP (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Agtrap dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Agtrap, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Agtrap à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine AGTRAP.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Agtrap pour l'étude de la signalisation de AGTRAP, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Agtrap essentiels à la fonction de AGTRAP
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Agtrap pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le AGTRAP plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le AGTRAP plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Agtrap. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le AGTRAP plasmide HDR (m) et le AGTRAP (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Agtrap pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Agtrap définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.