Plásmido Doble Nickase (h) AGS3: sc-402802-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)AGS3 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa AGS3 (h) y el plásmido de doble nickasa AGS3 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a GPSM1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: AGS3 Anticuerpo (G-2): sc-271721
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) AGS3 | sc-402802-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) AGS3 | sc-402802-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GPSM1 codifica el activador de la señalización de proteínas G 3 (AGS3), un regulador multidominio que se une a subunidades Gαi/o y modula el ciclo de las proteínas G heterotriméricas de forma independiente de la activación clásica por GPCR. A través de sus motivos TPR y GPR/GoLoco, AGS3 actúa como andamiaje de complejos de señalización que influyen en la desensibilización de receptores, el tráfico vesicular y procesos asociados a la polaridad, integrando señales procedentes de redes de cAMP/PKA y de pequeñas GTPasas. La actividad de AGS3 se ha vinculado al control de programas de migración y diferenciación celular, y se han descrito alteraciones en la expresión de GPSM1 o en el equilibrio de su señalización en contextos de neurobiología y de reconfiguración de la señalización asociada a tumores. Estas propiedades hacen de GPSM1 un objetivo útil para analizar la interconexión entre vías reguladas por proteínas G e identificar efectores aguas abajo que determinan el estado celular.
AGS3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GPSM1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GPSM1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GPSM1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GPSM1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.