Agrin CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-419044

概要

Agrnは、細胞外マトリックスに存在する大型のヘパラン硫酸プロテオグリカンであるアグリンをコードしており、細胞―マトリックス相互作用を組織化し、特殊化したシナプス構造の形成に寄与します。マウスでは、アグリンはアセチルコリン受容体のクラスター形成や前・後シナプス分化の安定化を担うシグナル伝達ネットワークを介して神経筋接合部の成熟を調節する因子として最もよく知られており、同時に基底膜の構造や神経回路の結合性にも影響を与えます。シナプス以外でも、アグリンはメカノトランスダクションや接着関連経路に関与し、細胞骨格の構成や組織の健全性に影響します。アグリンの生物学的機能の破綻は、神経筋および神経発達の表現型、ならびに疾患に伴う組織機能障害に関係するマトリックス・リモデリングの異常と関連づけられています。

Agrin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるAgrn遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Agrn内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Agrnのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Agrinタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Agrinシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Agrn欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Agrinの機能に不可欠なAgrnエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Agrnゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Agrin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびAgrin CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Agrn遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Agrin HDRプラスミド（m）および Agrin HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはAgrnホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のAgrn標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。