AGPS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-432759

Übersicht

Agps kodiert die Alkylglyceronphosphat-Synthase (AGPS), ein peroxisomales Enzym, das einen zentralen Schritt der Etherbindungsbildung in der Plasmalogen-Biosynthese katalysiert. Durch die Regulation der zellulären Pools an Ether-Phospholipiden trägt AGPS zur Membranarchitektur, zur Zusammensetzung von Lipid Rafts und zur Redox-Pufferung über die plasmalogenassoziierte antioxidative Kapazität bei. Das AGPS-abhängige Lipid-Remodeling beeinflusst die metabolische Kopplung zwischen Peroxisomen und endoplasmatischem Retikulum sowie die übergeordnete Homöostase der Glycerophospholipide. Störungen des Etherlipidstoffwechsels werden mit peroxisomenbezogenen metabolischen Phänotypen und neuroentwicklungsbedingten Funktionsstörungen in Verbindung gebracht, was den Einsatz von Agps-Targeting zur Modellierung von Lipiddefekten auf Signalweg-Ebene in Maus-Systemen unterstützt.

Das AGPS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Agps-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Agps-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Agps nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die AGPS-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Agps-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der AGPS-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Agps-Exone abzielen, die für die AGPS-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Agps-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom AGPS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom AGPS CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Agps-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das AGPS HDR-Plasmid (m) und AGPS HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Agps-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Agps-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.