Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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aggrecan Double Nickase Plasmid (h): sc-400760-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das aggrecan Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- aggrecan Double-Nickase-Plasmid (h) und aggrecan Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ACAN abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: aggrecan: sc-33695
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
aggrecan Double Nickase Plasmid (h) | sc-400760-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
aggrecan Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400760-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ACAN kodiert Aggrecan, ein wichtiges Chondroitinsulfat-Proteoglykan der extrazellulären Knorpelmatrix, das an Hyaluronan und Link-Protein bindet und so große Aggregate bildet, die dem Knorpel Widerstandsfähigkeit gegenüber Druckbelastung verleihen. Synthese, Sekretion und Umsatz von Aggrecan sind zentrale Bestandteile der Differenzierungsprogramme von Chondrozyten und der Matrixhomöostase und stehen in Wechselwirkung mit Signalwegen, die den Aufbau und die Umgestaltung der extrazellulären Matrix regulieren – einschließlich anaboler Signale sowie der proteasevermittelten Spaltung durch Mitglieder der ADAMTS- und MMP-Familien. Störungen der ACAN-Expression oder der Aggrecan-Integrität verändern die Biomechanik des Knorpels und die Matrixorganisation und tragen zu degenerativen und entwicklungsbedingten Skelettphänotypen bei. Diese Eigenschaften machen ACAN zu einem zentralen Ziel für die Untersuchung der Knorpelbiologie, des Signal-Crosstalks in der extrazellulären Matrix und der Mechanismen des Matrixabbaus.
aggrecan Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ACAN-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ACAN abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ACAN-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ACAN-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.