aggrecan Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419039

Panoramica

Acan codifica l’aggrecano, un importante proteoglicano a solfato di condroitina della matrice extracellulare cartilaginea che conferisce resistenza alla compressione formando grandi aggregati con ialuronano e proteine di collegamento. La sintesi, la secrezione e l’assemblaggio nella matrice dell’aggrecano sono processi centrali per la differenziazione dei condrociti e la maturazione della cartilagine di accrescimento, integrandosi con i programmi di omeostasi della cartilagine influenzati dalla segnalazione di TGF-β, BMP e citochine infiammatorie. Il clivaggio proteolitico dell’aggrecano da parte delle aggrecanasi ADAMTS e delle metalloproteinasi della matrice contribuisce al rimodellamento della matrice extracellulare e alla perdita dell’integrità cartilaginea. Un turnover dell’aggrecano deregolato e una ridotta espressione di Acan sono implicati in fenotipi di displasia scheletrica e in processi degenerativi articolari, rendendo Acan un bersaglio chiave per la ricerca in biologia muscoloscheletrica e della cartilagine nei modelli murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO aggrecan (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Acan in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Acan insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Acan a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina aggrecan.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Acan per lo studio della segnalazione di aggrecan, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Acan critici per la funzione di aggrecan
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Acan per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal aggrecan CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal aggrecan CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Acan. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal aggrecan Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR aggrecan (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Acan per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Acan definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.