aggrecan CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419039

Übersicht

Acan kodiert Aggrecan, ein wichtiges Chondroitinsulfat-Proteoglykan der extrazellulären Knorpelmatrix, das durch die Bildung großer Aggregate mit Hyaluronan und Link-Proteinen die Druckelastizität des Knorpels gewährleistet. Synthese, Sekretion und Matrixassemblierung von Aggrecan sind zentrale Prozesse der Chondrozytendifferenzierung und der Reifung der Wachstumsfuge und stehen in Wechselwirkung mit Programmen der Knorpelhomöostase, die durch TGF-β-, BMP- und inflammatorische Zytokin-Signalwege beeinflusst werden. Die proteolytische Spaltung von Aggrecan durch ADAMTS-Aggrecanasen und Matrixmetalloproteinasen trägt zum Umbau der extrazellulären Matrix und zum Verlust der Knorpelintegrität bei. Eine fehlregulierte Aggrecan-Umsetzung und eine verminderte Acan-Expression werden mit Skelettdysplasie-Phänotypen und degenerativen Gelenkprozessen in Verbindung gebracht, wodurch Acan in Mausmodellen ein zentrales Ziel der muskuloskelettalen und knorpelbiologischen Forschung darstellt.

Das aggrecan CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Acan-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Acan-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Acan nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die aggrecan-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Acan-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der aggrecan-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Acan-Exone abzielen, die für die aggrecan-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Acan-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom aggrecan CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom aggrecan CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Acan-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das aggrecan HDR-Plasmid (m) und aggrecan HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Acan-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Acan-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.