aggrecan Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419039

Descripción general

Acan codifica el agrecano, un proteoglicano mayoritario de sulfato de condroitina de la matriz extracelular del cartílago que aporta resistencia a la compresión al formar grandes agregados con hialuronano y proteínas de enlace. La síntesis, secreción y ensamblaje en la matriz del agrecano son procesos centrales para la diferenciación de los condrocitos y la maduración de la placa de crecimiento, e integran programas de homeostasis del cartílago influenciados por la señalización de TGF-β, BMP y citocinas inflamatorias. La escisión proteolítica del agrecano por aggrecanasas ADAMTS y metaloproteinasas de la matriz contribuye a la remodelación de la matriz extracelular y a la pérdida de la integridad del cartílago. La desregulación del recambio del agrecano y la disminución de la expresión de Acan se han implicado en fenotipos de displasia esquelética y en procesos degenerativos articulares, lo que convierte a Acan en un objetivo clave para la investigación en biología musculoesquelética y del cartílago en modelos murinos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO aggrecan (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Acan en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Acan junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Acan tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína aggrecan.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Acan para la investigación de la señalización de aggrecan, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Acan críticos para la función de aggrecan
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Acan para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido aggrecan CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido aggrecan CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Acan. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR aggrecan (m) y el plásmido HDR aggrecan (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Acan para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Acan definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.