aggrecan Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400760

Descripción general

ACAN codifica el agrecano, un gran proteoglicano de sulfato de condroitina que forma la columna vertebral hidratada de la matriz extracelular del cartílago al unirse al hialuronano y a la proteína de enlace, lo que permite resistir cargas compresivas. El recambio del agrecano está coordinado por programas anabólicos de los condrocitos y por la proteólisis extracelular catabólica, incluida la escisión por agrecanasas ADAMTS y las vías de remodelación de la matriz que dan forma a la biomecánica del tejido. La alteración de la expresión de ACAN o del procesamiento del agrecano desestabiliza la homeostasis del cartílago y se ha implicado en fenotipos esqueléticos degenerativos y del desarrollo, lo que lo convierte en un nodo clave para estudiar la organización de la matriz extracelular y la mecanobiología. Por ello, ACAN se utiliza ampliamente como marcador y determinante funcional en estudios de diferenciación de condrocitos, biología de la placa de crecimiento y ensamblaje de la matriz cartilaginosa.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO aggrecan (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ACAN en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ACAN junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ACAN tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína aggrecan.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ACAN para la investigación de la señalización de aggrecan, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de ACAN críticos para la función de aggrecan
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ACAN para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido aggrecan CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido aggrecan CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ACAN. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR aggrecan (h) y el plásmido HDR aggrecan (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ACAN para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ACAN definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.