ADSL Double Nickaseプラスミド (h): sc-404936-NIC

アデニロコハク酸リアーゼ（ADSL）は、de novoプリン生合成における二機能性酵素であり、アデニロコハク酸をAMPへ、SAICARをAICARへ変換する反応を触媒することで、ヌクレオチド代謝を細胞のエネルギーバランスや増殖能と結び付けている。プリンヌクレオチドおよび経路中間体のプールを調節することで、ADSL活性は、急速に分裂する細胞におけるDNA/RNA合成、複製ストレス応答、代謝シグナル伝達に影響を与える。ヒトADSLの機能喪失変異はプリン恒常性を破綻させ、サクシニルプリンの蓄積と神経発達障害を特徴とする神経代謝疾患であるアデニロコハク酸リアーゼ欠損症と関連している。研究では、プリノソームの動態、遺伝子発現の代謝制御、ならびにプリン経路の攪乱が細胞ストレス表現型に及ぼす寄与を解明する目的でADSLが解析されている。

ADSL ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ADSL 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ADSL内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ADSLの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ADSLが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。