Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
ADRP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400802
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- ADRP El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico ADRP, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ADRP Anticuerpo (B-6): sc-377429
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
ADRP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-400802 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
PLIN2 codifica la proteína relacionada con la diferenciación adiposa (ADRP), una proteína de recubrimiento de las gotículas lipídicas que regula el almacenamiento de lípidos neutros y la dinámica de la biogénesis, expansión y recambio de dichas gotículas. ADRP coordina las interacciones entre las gotículas lipídicas y las membranas celulares, e influye en procesos metabólicos como el manejo de ácidos grasos, las respuestas al estrés lipotóxico y la comunicación entre orgánulos en hepatocitos, adipocitos y macrófagos. Por su papel en el tráfico y almacenamiento intracelular de lípidos, PLIN2 se estudia comúnmente en el contexto de la esteatosis hepática, la disfunción metabólica asociada a la obesidad y la formación de células espumosas durante la aterogénesis. La alteración de la expresión de PLIN2 también se investiga en cánceres con fenotipos ricos en gotículas lipídicas, donde los programas de almacenamiento lipídico pueden favorecer la proliferación y la adaptación al estrés oxidativo.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO ADRP (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PLIN2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PLIN2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PLIN2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ADRP.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PLIN2 para la investigación de la señalización de ADRP, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de PLIN2 críticos para la función de ADRP
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PLIN2 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido ADRP CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido ADRP CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PLIN2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ADRP (h) y el plásmido HDR ADRP (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PLIN2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PLIN2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.