Plasmide Double Nickase (h) ADPN: sc-406096-NIC

PNPLA3 code l’adiponutrine (ADPN), une phospholipase de type patatine localisée au niveau des gouttelettes lipidiques, qui régule l’hydrolyse des triglycérides et l’activité acyltransférase dans les hépatocytes et les adipocytes. ADPN intègre des signaux nutritionnels et hormonaux afin de moduler le remodelage des lipides, le couplage avec la lipogenèse de novo et le renouvellement des gouttelettes lipidiques, reliant ainsi l’état métabolique au stockage lipidique intracellulaire. Les variations génétiques et les modifications de l’expression de PNPLA3 sont fortement associées à l’accumulation de graisse hépatique et à la progression des phénotypes de stéatose hépatique, et sont étudiées dans le contexte de la stéatose, de l’inflammation et des voies de signalisation fibrogènes. En conséquence, PNPLA3/ADPN est largement utilisé comme point d’entrée moléculaire pour explorer les voies du métabolisme lipidique et leurs réponses au stress en aval dans des modèles cellulaires humains.

ADPN Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PNPLA3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PNPLA3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PNPLA3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PNPLA3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.