ADF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-417540

Übersicht

Das humane DSTN-Gen kodiert den Actin Depolymerizing Factor (ADF), ein zentrales aktinbindendes Protein, das F‑Aktin schneidet und depolymerisiert, um den Filamentumsatz aufrechtzuerhalten und die Homöostase des Zytoskeletts zu sichern. Durch die Regulation der Aktindynamik unterstützt ADF unter anderem Prozesse wie die Umgestaltung von Lamellipodien, Endozytose, Zytokinese und Zellmigration und steht funktionell in Verbindung mit der Signalübertragung durch GTPasen der Rho-Familie sowie mit Phosphorylierungsnetzwerken, die Cofilin/ADF regulieren. Eine veränderte Aktin-Umgestaltung wird mit Defekten der epithelialen Barriereintegrität, der neuronalen Morphogenese und invasivem Zellverhalten in Zusammenhang gebracht, was DSTN zu einem relevanten Knotenpunkt für die Untersuchung zytoskelettgetriebener Krankheitsphänotypen macht. Eine Störung von DSTN ist daher nützlich, um zu analysieren, wie Aktinfluss die Mechanotransduktion, Adhäsionssignale und Stressantworten in menschlichen Zellen beeinflusst.

Das ADF CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des DSTN-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des DSTN-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von DSTN nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ADF-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von DSTN-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ADF-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf DSTN-Exone abzielen, die für die ADF-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere DSTN-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ADF CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ADF CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des DSTN-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ADF HDR-Plasmid (h) und ADF HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von DSTN-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten DSTN-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.