Adenylate cyclase 9/AC9/ADCY9 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406817

Übersicht

ADCY9 kodiert die Adenylatcyclase 9 (AC9), ein membranassoziiertes Enzym, das ATP in zyklisches AMP (cAMP) umwandelt und damit einen zentralen Second-Messenger-Input für die GPCR-vermittelte Signalübertragung liefert. Die AC9-abhängige cAMP-Dynamik reguliert PKA- und EPAC-vermittelte Phosphorylierungsnetzwerke, die Transkriptionsprogramme, die Aktivität von Ionenkanälen und zelltypspezifische Antworten wie die Stoffwechselregulation und inflammatorische Signalwege prägen. Als Teil der Adenylatcyclase-Familie trägt AC9 zu kompartimentierten cAMP-Mikrodomänen bei, die die Rezeptordesensibilisierung und die Rückkopplungskontrolle von Signalkaskaden beeinflussen. Eine Fehlregulation von cAMP-Signalwegen ist an kardiometabolischen, neurobiologischen und immunbezogenen Krankheitsmechanismen beteiligt, wodurch ADCY9 ein nützliches Ziel für Pathway-Mapping sowie Genotyp-Phänotyp-Studien ist.

Das Adenylate cyclase 9/AC9/ADCY9 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ADCY9-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ADCY9-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ADCY9 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Adenylate cyclase 9/AC9/ADCY9-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ADCY9-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Adenylate cyclase 9/AC9/ADCY9-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ADCY9-Exone abzielen, die für die Adenylate cyclase 9/AC9/ADCY9-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ADCY9-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Adenylate cyclase 9/AC9/ADCY9 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Adenylate cyclase 9/AC9/ADCY9 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ADCY9-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Adenylate cyclase 9/AC9/ADCY9 HDR-Plasmid (h) und Adenylate cyclase 9/AC9/ADCY9 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ADCY9-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ADCY9-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.