Plasmide CRISPR/Cas9 KO Adenylate cyclase 6/AC6/ADCY6 (m): sc-418996

Présentation

Adcy6 code l’adénylate cyclase 6 (AC6/ADCY6), une enzyme associée à la membrane qui convertit l’ATP en AMPc en aval de la signalisation des récepteurs couplés aux protéines G. En modulant la dynamique de l’AMPc, AC6 régule des programmes de phosphorylation dépendants de PKA et d’EPAC, qui influencent l’activité des canaux ioniques, le contrôle métabolique et les réponses transcriptionnelles dépendantes des stimuli. Dans les tissus murins, ADCY6 est fréquemment associée aux voies β‑adrénergiques et à d’autres voies couplées à Gs qui coordonnent la contractilité cardiaque, le tonus du muscle lisse des voies aériennes et la régulation rénale du sel et de l’eau. Une dérégulation de la signalisation de l’AMPc impliquant ADCY6 a été associée à des phénotypes cardiopulmonaires et rénaux, ce qui soutient son utilisation dans des études mécanistiques portant sur l’intégration des signaux GPCR et l’homéostasie des seconds messagers.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Adenylate cyclase 6/AC6/ADCY6 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Adcy6 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Adcy6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Adcy6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Adenylate cyclase 6/AC6/ADCY6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Adcy6 pour l'étude de la signalisation de Adenylate cyclase 6/AC6/ADCY6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Adcy6 essentiels à la fonction de Adenylate cyclase 6/AC6/ADCY6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Adcy6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Adenylate cyclase 6/AC6/ADCY6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Adenylate cyclase 6/AC6/ADCY6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Adcy6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Adenylate cyclase 6/AC6/ADCY6 plasmide HDR (m) et le Adenylate cyclase 6/AC6/ADCY6 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Adcy6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Adcy6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.