Adenylate cyclase 5/AC5/ADCY5 Plasmide Double Nickase (h): sc-401391-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Adenylate cyclase 5/AC5/ADCY5 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Adenylate cyclase 5/AC5/ADCY5 Double Nickase Plasmid (h) e il Adenylate cyclase 5/AC5/ADCY5 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ADCY5. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Adenylate cyclase 5/AC5/ADCY5 Plasmide Double Nickase (h) | sc-401391-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Adenylate cyclase 5/AC5/ADCY5 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-401391-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ADCY5 codifica l’adenilato ciclasi 5 (AC5), un enzima associato alla membrana che converte l’ATP in AMP ciclico, modulando la segnalazione dei secondi messaggeri a valle dei GPCR. AC5 è fortemente collegata a vie regolate da Gαs/Gαi che modulano programmi di fosforilazione dipendenti da PKA ed EPAC, con effetti sull’eccitabilità neuronale, la plasticità sinaptica e la segnalazione metabolica. Attraverso il controllo della dinamica del cAMP, ADCY5 influenza le risposte trascrizionali, l’attività dei canali ionici e la regolazione a feedback della segnalazione recettoriale. Alterazioni genetiche e funzionali di ADCY5 sono state associate a fenotipi neuroevolutivi e legati al movimento, a supporto della sua rilevanza nello studio della segnalazione cAMP disfunzionale in modelli cellulari umani.
Adenylate cyclase 5/AC5/ADCY5 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ADCY5 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ADCY5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ADCY5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ADCY5 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.