Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-430515-ACT

Das Mausgen *Adcy3* kodiert die Adenylatcyclase 3 (AC3/ADCY3), ein membranassoziiertes Enzym, das ATP zu cAMP umsetzt und dadurch die GPCR-Signalübertragung mit nachgeschalteten Effektorwegen über PKA und EPAC koppelt. Die ADCY3-abhängige cAMP-Produktion prägt stimulusabhängige Transkriptionsprogramme über CREB und hilft, zelluläre Antworten wie metabolische Sensorik, neuroendokrine Signalgebung sowie regulierte sekretorische und neuronale Prozesse zu koordinieren. Bei Mäusen wird die Funktion von *Adcy3* häufig in Zusammenhängen untersucht, in denen die cAMP-Dynamik die Energiebilanz und die sensorische Signaltransduktion steuert; dies liefert mechanistische Verknüpfungen zu adipositasbezogenen Phänotypen und umfassenderen metabolischen Dysregulationen. Als Signal-Hub ist ADCY3 zudem relevant, um Crosstalk zwischen GPCR-Eingangssignalen und der Second-Messenger-gesteuerten Kontrolle der Genexpression zu analysieren.

Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Adcy3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Adcy3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Adcy3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Adcy3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Adcy3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.