Plásmido CRISPR de Activación (h) Adenylate cyclase 2/AC2/ADCY2: sc-402994-ACT

El gen humano **ADCY2** codifica la **adenilato ciclasa 2 (AC2)**, una enzima asociada a la membrana que convierte ATP en AMP cíclico (AMPc) en respuesta a la señalización de receptores acoplados a proteínas G, en particular a través de la subunidad estimuladora **Gαs** y de aportes moduladores de **Gβγ**. Al ajustar los niveles intracelulares de AMPc, AC2 regula programas de fosforilación dependientes de **PKA** y **EPAC** que influyen en la actividad de canales iónicos, la liberación de neurotransmisores, las respuestas metabólicas y salidas transcripcionales como la señalización de **CREB**. Por lo tanto, la actividad de ADCY2 es fundamental para la integración de señales en la membrana plasmática y para la dinámica temporal de la propagación de segundos mensajeros en células excitables y no excitables. Estudios genéticos y funcionales han vinculado una regulación alterada de la vía del AMPc que involucra a ADCY2 con fenotipos neuropsiquiátricos y conductuales, lo que respalda su relevancia para estudios mecanísticos de la señalización neuronal y la homeostasis celular.

Adenylate cyclase 2/AC2/ADCY2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ADCY2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Adenylate cyclase 2/AC2/ADCY2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ADCY2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ADCY2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Adenylate cyclase 2/AC2/ADCY2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ADCY2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Adenylate cyclase 2/AC2/ADCY2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Adenylate cyclase 2/AC2/ADCY2 en células tumorales con expresión de ADCY2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.