Particules Lentivirales d'Activation (h) adenosine deaminase: sc-402201-LAC

L’ADA humaine code l’adénosine désaminase, une enzyme clé du métabolisme des purines qui désamine de façon irréversible l’adénosine et la désoxyadénosine en inosine et désoxyinosine, régulant ainsi les réserves d’adénosine intracellulaires et extracellulaires. En contrôlant l’équilibre des nucléosides qui influencent la synthèse de l’ADN, l’homéostasie énergétique et la signalisation via les voies des récepteurs de l’adénosine, l’ADA contribue au développement des lymphocytes et, plus largement, au fonctionnement des cellules immunitaires. Une activité de l’ADA dérégulée perturbe le catabolisme des purines et peut modifier le renouvellement des nucléotides, l’équilibre rédox et les programmes de signalisation inflammatoire. L’ADA est donc largement étudiée dans des modèles d’immunodéficience, d’activation immunitaire et de stress métabolique, où le flux des purines et la signalisation médiée par l’adénosine sont des variables centrales.

Les particules d'activation lentivirales adenosine deaminase (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de ADA dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales adenosine deaminase (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription ADA, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de adenosine deaminase. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif ADA ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.