Plasmide CRISPR/Cas9 KO adenosine deaminase (h): sc-402201

Présentation

L’ADA humaine code l’adénosine désaminase, une enzyme cytosolique qui catalyse la désamination de l’adénosine et de la désoxyadénosine en dérivés de l’inosine, assurant l’homéostasie des purines et régulant les pools intracellulaires de nucléotides de désoxyadénosine. En contrôlant les niveaux d’adénosine immunomodulatrice et de métabolites de la désoxyadénosine potentiellement cytotoxiques, l’ADA influence le développement, la prolifération et les réseaux de signalisation des lymphocytes liés au stress cellulaire et au contrôle métabolique. L’activité de l’ADA s’articule avec les voies de sauvetage et de catabolisme des purines, modulant l’équilibre des nucléotides, la capacité de synthèse de l’ADN et la signalisation médiée par les récepteurs de l’adénosine dans des tissus immunitaires et non immunitaires. L’altération génétique d’ADA est associée à des phénotypes d’immunodéficience sévère et a été largement utilisée pour étudier le métabolisme purinergique, la viabilité des cellules immunitaires et la régulation de l’expression génique induite par les métabolites.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO adenosine deaminase (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ADA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ADA, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ADA à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine adenosine deaminase.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ADA pour l'étude de la signalisation de adenosine deaminase, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ADA essentiels à la fonction de adenosine deaminase
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ADA pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le adenosine deaminase plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le adenosine deaminase plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ADA. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le adenosine deaminase plasmide HDR (h) et le adenosine deaminase (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ADA pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ADA définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.